菌落pcr会出现假阳性结果吗
答案:5 mip版
解决时间 2021-01-28 05:23
- 提问者网友：日光獨自傾城
- 2021-01-27 05:48
菌落pcr会出现假阳性结果吗
最佳答案
- 二级知识专家网友：嘴硬欠吻
- 2021-01-27 06:44
我暂时保留我的看法！
全部回答
- 1楼网友：回眸只為那壹抹淺笑
- 2021-01-27 10:43
这个完全是有可能的
- 2楼网友：那年夏天
- 2021-01-27 09:18
因为你选择的引物不太合适，最好用一个载体上的通用引物加一条目的基因的特异引物做菌落pcr，这样会大大降低假阳性；如果你用目的基因本身引物做菌落pcr，挑菌时一定要小心不要沾到培养基（里面有大量的未连接的片段），然后pcr扩增的循环数要少（<25）,做好阴性对照（在平板上没有斑的地方挑一下），跑出亮亮的目的片段才是真的阳性克隆
- 3楼网友：可惜感動不是心動
- 2021-01-27 09:13
菌落PCR的结果参考价值比较下，假阳性太厉害。还是以测序结果为准。可以在测序之前做一下质粒酶切验证
- 4楼网友：时光暗淡了承诺
- 2021-01-27 07:41
条带两端上扬这种情况在跑电泳很常见，一般把电压调低点跑久点会改善，有时候胶没有做好也会出现这样的情况，注意拔梳子的时候一定要平衡。以前做克隆的时候，阴性对照模板用水扩增也出现过有条带，就像你最后一个泳道。老板说是污染了，把所有的试剂全部换新的，而且加样条件也非常注意，后来就没有条带了。
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