酶切后的DNA可直接乙醇沉淀吗
答案:2 mip版
解决时间 2021-01-16 11:38
- 提问者网友：繁华落尽
- 2021-01-15 23:12
酶切后的DNA可直接乙醇沉淀吗
最佳答案
- 二级知识专家网友：小爷我灬很狂
- 2021-01-16 00:05
可以，但是最好使用醋酸铵，也可以不加，回收效率可能会低一点，操作步骤：
方法一：
1. 将忆确定的回收产物溶液于加有300 µL TE缓冲液的灭菌的1.5 mL Eppendorf管中。
2. 加入等体积酚-氯仿-异戊醇，摇晃均匀。
3. 12000 rpm离心5 min。
4. 小心将水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍体积（780 µL即可）预冷无水乙醇，以及10%水相体积的3 M NaAC（pH 5.2）。
5. 置液氮3 min，取出后可置于－20℃放几min。小心防止管子爆裂。
6. 12000 rpm离心10 min。
7. 迅速弃上清，一般在管底会有针尖大小的沉淀物，小心用无水乙醇清洗后置于恒温器上干燥（55℃）5~10 min至无乙醇气味，再加入20 µL ddH2O溶解。
8. 取20 µL电泳定量后－20℃储存备用。
方法二：
先把乙醇-20度预冷，酶切完后加入2倍体积的无水乙醇，-20度放置10min以上，12000rpm离心10min，管底出现白色沉淀，倒掉上清，换用70%乙醇重复一次，再用水溶解白色沉淀既可，损失率蛮大，回收率只有40%，或者更低。
方法一：
1. 将忆确定的回收产物溶液于加有300 µL TE缓冲液的灭菌的1.5 mL Eppendorf管中。
2. 加入等体积酚-氯仿-异戊醇，摇晃均匀。
3. 12000 rpm离心5 min。
4. 小心将水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍体积（780 µL即可）预冷无水乙醇，以及10%水相体积的3 M NaAC（pH 5.2）。
5. 置液氮3 min，取出后可置于－20℃放几min。小心防止管子爆裂。
6. 12000 rpm离心10 min。
7. 迅速弃上清，一般在管底会有针尖大小的沉淀物，小心用无水乙醇清洗后置于恒温器上干燥（55℃）5~10 min至无乙醇气味，再加入20 µL ddH2O溶解。
8. 取20 µL电泳定量后－20℃储存备用。
方法二：
先把乙醇-20度预冷，酶切完后加入2倍体积的无水乙醇，-20度放置10min以上，12000rpm离心10min，管底出现白色沉淀，倒掉上清，换用70%乙醇重复一次，再用水溶解白色沉淀既可，损失率蛮大，回收率只有40%，或者更低。
全部回答
- 1楼网友：凊搽蒗囝
- 2021-01-16 01:19
0.5-1倍体积的异丙醇可以选择性的沉淀dna和大分子rrna和mrna，但是对5srna，trna以及多糖等不产生沉淀。一般不需要等温放置很长时间，其缺点是易使盐类dna共沉淀，而且异丙醇难以挥发除去。必须用70%乙醇洗涤。
无水乙醇沉淀dna需要阳离子如na离子的存在，而且需要1/1o体积的naac，并且加2倍体积的无水乙醇，而且沉淀的盐少，易挥发除去。缺点是总体积较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时。同样需要70%乙醇洗涤。
我个人认为无水乙醇沉淀dna的效果更好些，dna在体积较大的条件下可以沉淀的更充分，提取的dna含的盐离子也很好，而且乙醇也容易挥发去除，纯度相对来说也较好。
两者都适合沉淀线形和闭环的dna或质粒，因为两者化学性质都是醇类，沉淀原理是相似。
如果你的dna含量丰富的话，沉淀10min 就足够了，如果含量低，则需要在-20度沉淀30min-2小时。可以不短观察沉淀的量决定沉淀时间。
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